Western一抗二抗去除液的作用
Western一抗二抗去除液，用于Western Blot 中轉(zhuǎn)印了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western Blot中完成了一 抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學發(fā)光檢測后，有時還需要檢測 Actin、Tubulin 等內(nèi)參蛋白或檢測其它蛋白進行比較。通過使用Western一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白，與重新跑SDS-PAGE膠相比，不僅省時省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強。
Western一抗二抗去除液可變性已經(jīng)結(jié)合的抗體，使其失活，從而將同一張膜再用于其它抗體的雜交。與其它類型的一抗二抗去除液相比，該試劑不破壞抗原，處理過程中膜上抗原不丟失，因此可重復(fù)應(yīng)用的次數(shù)更多、靈敏度更高。主要特征
操作簡單快速對抗原蛋白作用溫和，不會造成抗原蛋白的損轉(zhuǎn)印膜至少可重復(fù)使用3~5次
應(yīng)用
蛋白印記雜交膜（PVDF膜和NC膜）的再利用。
儲存
4°C保存，有效期1年。
蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針"是抗體，“顯色"用標記的二抗。經(jīng)過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。
在線咨詢